转基因小鼠特异性免疫效应淋巴细胞影响乙型肝炎病毒复制的体外研究

摘要：目的：探讨转乙型肝炎病毒（HBV）基因的小鼠树突状细胞（DCs）刺激自体淋巴细胞在体外对HBV复制的影响。方法采用转HBV基因的小鼠DCs，在体外用HBV表面抗原（HBsAg）和核心抗原（HBcAg）诱导DCs成熟。将成熟DCs与小鼠自体来源的淋巴细胞共刺激后形成特异性的免疫效应细胞（IEC），再与人肝癌细胞系HepG 2.2.15细胞共培养，采用生物化学、流式细胞仪、荧光实时定量聚合酶链反应（RT-PCR）和酶联免疫吸附试验（ELISA）等方法检测肝功能、HBV DNA、共价闭合环状DNA（cccDNA）水平和炎症相关因子的变化。结果诱导成熟的DCs与IEC共同作用HepG 2.2.15后，其细胞的形态、酶学无明显变化，但上清液中HBV DNA分泌明显减少，以及细胞内HBV DNA和cccDNA水平也明显降低，与未成熟DCs组比较差异有统计学意义。细胞上清液中炎症相关因子的分泌有明显变化：HBV DNA高表达时，IFN-γ和IL-2水平下降，而IL-10升高；HBV DNA低表达时，干扰素-γ（IFN-γ）和细胞白介素-2（IL-2）水平上升，而IL-10水平下降。结论 HBV相关抗原刺激成熟的转HBV小鼠的DCs与自体淋巴细胞共刺激后形成的特异性IEC，在体外对HBV复制具有抑制作用，细胞因子参与其变化。