免疫抑制小鼠急性重症肺部感染中巨噬细胞亚型变化与乌司他丁调控效应

摘要：目的：探讨免疫抑制状态下重症肺部感染小鼠肺巨噬细胞亚型变化情况，观察乌司他丁（UTI）干预的巨噬细胞调控效应，初步明确其拮抗重症肺部炎症的作用机制。方法选取60只Balb/c小鼠，分为对照组、模型组和乌司他丁组，每组20只小鼠；其中模型组采用腹腔注射甲泼尼龙（30 mg/kg），气管内滴注内毒素（10 mg/kg）制备免疫低下急性重症肺部感染小鼠模型；乌司他丁组则在建模前后腹腔注射乌司他丁（1×105 U/kg）干预；主要观察小鼠呼吸情况、肺泡灌洗液炎性细胞构成、肺组织病理改变与评分以及M1和M2巨噬细胞等指标，采用免疫组化法检测肺组织M2巨噬细胞的CD163表达，采用实时定量PCR检测肺泡灌洗液细胞中M1巨噬细胞分泌分子肿瘤坏死因子-α（TNF-α）、白细胞介素-6（IL-6）、诱导型一氧化氮合成酶（iNOS）和M2巨噬细胞标志与分泌分子CD206、Arg-1、IL-10的mRNA表达水平。结果模型组和乌司他丁组小鼠一般情况较差，部分小鼠出现呼吸窘迫现象，其中模型组小鼠肺泡腔与间质炎性细胞浸润，肺间质增宽，乌司他丁组病变减轻，与模型组相比，肺损伤评分显著降低〔（肺损伤评分（分）：6.77±0.85比8.21±0.92，P＜0.05〕，乌司他丁组与模型组肺泡灌洗液中中性粒细胞比例显著增高，但两组差异不大。除iNOS外，M1和M2巨噬细胞相关分子均高于对照组，与模型组相比，乌司他丁组M1巨噬细胞相关分子TNF-α、IL-6以及M2巨噬细胞相关分子IL-10、CD206均显著降低〔TNF（2-ΔΔCt）：0.42±0.18比0.76±0.12，IL-6（2-ΔΔCt）：0.72±0.26比1.22±0.32，IL-10（2-ΔΔCt）：3.91±1.35比6.84±2.13， CD206（2-ΔΔCt）：0.61±0.91比0.92±0.31，均P＜0.05〕，而iNOS和Arg-1则与模型组无显著差别。此外，免疫组化染色检测乌司他丁组肺组织M2巨噬细胞的CD163表达，其结果明显低于模型组〔CD163（A）值：31430.0±2417.97比69855.0±6489.5，P＜0.05〕，但高于对照组。结论在辅助T细胞Th1单向偏移Th2免疫抑制状态中，重症肺部感染的巨噬细胞呈M1偏向M2亚群优势活化的状态，乌司他丁则可能通过调控M1与M2亚群再平衡来发挥其抗炎效应。